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細胞培養(yǎng)具體步驟的描述
日期：2025-05-10 04:54
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摘要：
細胞培養(yǎng)具體步驟：
一、細胞復蘇
將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
二、細胞傳代
細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓**，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
三、細胞凍存
細胞密度達到80%～90%時，去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，**天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮，可以保存三個月。
凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
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